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应用领域——生物学方向细胞冻存技术是生物学保存物种的重要手段。在环境遭到未有过的破坏动物、植被随时可能面临灭l绝危险的今天，更是尤为关键，虽然不是治本的方法，但至少可以尽可能的留下那些曾经存在的生命痕迹。
发展历史：1. 1776年， Spallanzani尤早发表了“冷”处理对“细胞”生命活动影响的报道。2.十九世纪中后叶，许多早期的工作者(Prevost， 1840; de Quatrefages， 1853; Mantegazza， 1866; Scheuk， 1870) 重复研究了低温处理对精l子活动的影响，得出了和SpalLanzani相似的结论。即“冷不能杀l死精l子”。
这种因细胞内部结冰而致的细胞损伤即就是冰晶损伤(Iacellular ice damage)。冰晶损伤是由冷却速度过快造成，冷却速度越快，冰晶损伤越大。同时随着温度的下降，细胞外部的水分会先结冰，从而使得未结冰的溶液中电解质浓度升高，细胞膜上的脂质会因长时问暴露在高溶质的溶液中而受到损坏，细胞发生渗漏，导致在复温时大量水分渗入细胞内造成细胞死l亡。这种因保存溶液溶质浓度升高而致的细胞损伤被称为溶液损伤(Solution damage)。溶液损伤是由冷却速度过慢，使细胞在高浓度的溶液中暴露的时间过长而造成，冷却速度越慢，此损伤越严重。
2)离心洗涤:向培养瓶内加5~10m1预冷的MEM使细胞悬浮，再将其吸出置离心管中，以1000rpm 离心8~10分钟后弃去上清液。
3)细胞悬液的制备:向离心管内逐滴缓慢加入预冷的冻存保护液，螺口冷冻管厂家，使细胞浓度为150~400万/ml，然后迅速分装于安瓿瓶中，每瓶加量为1ml。
4)致冷冻:将安瓿瓶放入带有棉垫的纸盒或塑料盒内，直立置不同条件下致冷冻保存:a. 4℃两小时后移至-20℃作用2小时，再移入-40℃4小时后在-70℃下24小时投入液氮。b. -20℃4小时后移至-40℃，经4小时移人-70℃冰箱24小时，投入液氮。c. -40℃4小时后移入-70℃24小时后投入液氮。d. -20℃4小时后移入-70℃经24小时后投入液氮中。
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